兔NT-4ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)實(shí)驗規則：
1、將液體加到酶標孔中時(shí)，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì )自然流下去。       
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
3、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
4、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機時(shí)，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
5、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫6作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(cháng)期保存。
洗板方法：
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過(guò)程數次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機，應在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過(guò)程中。

兔NT-4ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，   
在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD     
值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋     
倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標     
準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值     
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋     
倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

兔NT-4ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。