完好的
人ELISA試劑盒包含哪些組分呢?
在人ELISA試劑盒實(shí)驗中,只需遵從它應有的規矩才干更好的完成實(shí)驗,對此,為您分析了保證實(shí)驗效果的幾大基礎:
1.要在實(shí)驗前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都康復到室溫,以使效果更安穩。
2.實(shí)驗時(shí),要使底物避光保存。
3.用槍羅致液體時(shí)速度不能太快,避免發(fā)作氣泡而使羅致量不。
4.羅致液體時(shí),要用量程和需要量靠近的槍去吸,削減過(guò)失。
5.要保證移液槍的性,過(guò)失不能超過(guò)2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確認。但有專(zhuān)。人員進(jìn)行糾正。
6.要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。羅致不同的液體后,要更換槍頭。即使是羅致標準品時(shí)。
ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等
完好的人ELISA試劑盒包含以下各組分:
1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
2.酶符號的抗原或抗體(結合物);
3.酶的底物;
4.陰性對照品和陽(yáng)性對照品(定性測定中),參考規范品和控制血清(定量測定中);
5.結合物及標本的稀釋液;
6.洗刷液
7.酶反響停止液。
人ELISA試劑盒操作過(guò)程:
1. 加規范品:在酶標包被板上設規范品孔,依次參加不同濃度的規范品50ul(主張每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔參加酶標試劑50μl。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 顯色:ELISA試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加停止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。