人鈣衛蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗操作步驟

ELISA試劑盒
標本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚(yú)等。
用途：科研實(shí)驗等領(lǐng)域科學(xué)研究，不得用于臨床診斷.
特點(diǎn)：靈敏性高、特異性強、重復性好.

試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）：6瓶。
3. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣根過(guò)氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過(guò)氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實(shí)驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過(guò)1個(gè)月，-80℃不應超過(guò)2個(gè)月；標本溶血會(huì )影響檢測結果，因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

ELISA試劑盒操作注意事項：
1）試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄，不可保存。
2）實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標板時(shí)應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發(fā)，避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感，避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
9）按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作

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