催產(chǎn)素檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）ELISA操作原理

德國進(jìn)口DRG

【檢測原理】 

在執行此測定之前，請閱讀完整的試劑盒說(shuō)明書(shū)。提供催產(chǎn)素標準品以生成測定的標準曲線(xiàn)，所有樣品應 從標準曲線(xiàn)中讀出。 將標準品或稀釋的樣品加入到包被有抗體的微孔板中，以捕獲兔抗體。將催產(chǎn)素-過(guò)氧化物酶聯(lián)物添加到標 準品和樣品的孔中。通過(guò)向每個(gè)孔中添加催產(chǎn)素多克隆抗體來(lái)啟動(dòng)結合反應。在 4°C 孵育過(guò)夜后，洗滌微 孔并添加提供的底物。底物與結合的催產(chǎn)素-過(guò)氧化物酶結合物反應。孵育 30 分鐘后，停止反應，并在能 夠測量 450 nm 波長(cháng)的酶標儀中檢測所產(chǎn)生顏色的強度。 使用大多數酶標儀提供的軟件對樣品的稀釋液進(jìn)行適當校正后，可以計算出樣品中催產(chǎn)素的濃度。

所需但未提供的其他材料

1. 蒸餾水或去離子水 2. 聚丙烯或玻璃管 3. Speedvac /離心濃縮器或 N 2氣體和瓦斯集合管進(jìn)行蒸發(fā) 4. 帶有一次性吸頭的移液器，例如 Eppendorf 移液槍?zhuān)删_分配 25 µL，50 µL 和 100 µL 5. 微孔板振蕩器 6. 450 nm 酶標儀 7. 四參數對數曲線(xiàn)（4PLC）擬合的軟件 

【儲存條件】 試劑盒在 4°C 下可保存至效期結束。 

【樣本類(lèi)型】 該測定方法已經(jīng)過(guò)血清，EDTA 和肝素血漿，唾液，澄清牛奶和組織培養樣品的驗證。 使用前，應將含有可見(jiàn)顆粒物的樣品離心。

催產(chǎn)素在所有物種中都是相同的，我們希望該試劑盒可以檢測人類(lèi)以外來(lái)源的催產(chǎn)素。 由于與魚(yú)神經(jīng)葉激素和中催產(chǎn)素的交叉反應性，該試劑盒還應能夠測量鳥(niǎo)類(lèi)，魚(yú)類(lèi)，兩棲動(dòng)物和爬行動(dòng)物 中的魚(yú)神經(jīng)葉激素。最終用戶(hù)應評估其他被測樣品中催產(chǎn)素的回收率。

【樣品制備】 血清和血漿樣本 在試劑盒中檢測之前，應使用提供的提取液或固相 C18 柱提取方案（應要求提供肽/蛋白質(zhì)提取方案）提 取血清和血漿樣品。 

使用提取液的方案： 1. 將 1 份樣品與 1.5 份提取液混合。

2. 然后在室溫下渦旋振蕩 90 分鐘。

3. 在 4°C 下以 1660 x g 離心 20 分鐘。 

4. 將上清液轉移到透明管中。 

5. 將上清液在 37℃下干燥濃縮。 

6. 用 250 µL 分析緩沖液復溶樣品。

唾液樣本 唾液樣本應使用血清和血漿樣本所述的提取試劑進(jìn)行提取。唾液應與 Sarstedt 唾液采集管一起收集，提取， 干燥并在 250 µL 的分析緩沖液中重新配制。 

牛奶樣本 牛奶樣品應通過(guò)以 10,000×g 離心 15 分鐘來(lái)澄清。刺穿頂部脂肪層并收集上清液。重復離心和收集兩次。 然后，在用于測定之前，必須使用提供的分析緩沖液將收集的上清液稀釋≥1:10。 澄清的牛奶樣品，即上清液，可以在-20℃下保存直至需要。

在制備后的 2 小時(shí)內使用所有樣品

【試劑準備】 使所有試劑平衡至室溫 30 分鐘。在將其運用于試劑盒之前，請確保所有樣品均已達到室溫并已適當稀釋。 

分析緩沖液 將一份濃縮液添加到四份去離子水中來(lái)稀釋分析緩沖液濃縮液 1：5。稀釋后，可在 4°C 下穩定 3 個(gè)月。 洗滌緩沖液 將一部分濃縮液添加到 19 份去離子水中來(lái)稀釋洗滌緩沖液濃縮液 1:20。稀釋后，在室溫下穩定 3 個(gè)月。

標準品制備 將試管標記為＃1 至＃8。 吸取 450 µL 分析緩沖液至＃1 試管中，然后吸取 300 µL 至其余試管中。 催產(chǎn)素原液包含有機溶劑。將移液器吸頭預沖洗幾次，以確保準確遞送。 小心地將 50 µL 催產(chǎn)素原液加入 1 號試管中，并*渦旋。然后再加入 200 µL 1 號管液至 2 號試管中并完 全渦旋。重復＃3 至＃8 試管的系列稀釋。 試管 1 至 8 中催產(chǎn)素的濃度將為 10,000、4,000、1,600、640、256、102.4、40.96 和 16.38 pg / mL。