人ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被兔堿性成纖維細胞生長(cháng)因子（bFGF）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔堿性成纖維細胞生長(cháng)因子（bFGF）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
人ELISA試劑盒樣本處理及要求
標本處理
1.只對人ELISA試劑盒本身負責，不對因使用該人ELISA試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
2.實(shí)驗前應預測標本含量，如果標本濃度過(guò)高，應對標本進(jìn)行稀釋?zhuān)瓜♂尯蟮臉吮痉?strong>人ELISA試劑盒的檢測范圍，計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3.若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中，建議進(jìn)行預實(shí)驗驗證其有效性，并注意留存樣本。
4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會(huì )由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導致ELISA實(shí)驗結果偏差。
5.若樣本為細胞培養上清，因該類(lèi)樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測不出的情況。
6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
7.建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )存在蛋白降解或變性導致實(shí)驗結果偏差。
要求
1.血清：全血標本請于室溫放置2小時(shí)或4過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20或-80保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2-8°C1000g離心20分鐘，或將標本放于-20或-80保存，但應避免反復凍融。
3.組織勻漿：用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果），稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4.細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20或-80保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會(huì )影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。
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更新時(shí)間：2019-06-20 
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