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如何判斷兔子ELISA試劑盒是否是基質(zhì)效應呢？

更新時(shí)間：2020-09-19      瀏覽次數：1591
　　在兔子ELISA試劑盒實(shí)驗中，偶爾會(huì )遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應導致的結果。
　　什么是基質(zhì)效應呢？
　　首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會(huì )對分析過(guò)程有顯著(zhù)干擾，影響分析結果的準確性。業(yè)內把這些影響統稱(chēng)為基質(zhì)效應。這是ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的雷。
　　如何判斷兔子ELISA試劑盒是否是基質(zhì)效應呢？
　　當單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗操作出現問(wèn)題，這時(shí)應增加重復，進(jìn)步操作技術(shù)。當許多樣本都低于空白值時(shí)，應思考基質(zhì)效應的影響，建立校正曲線(xiàn)予以修改?；|(zhì)效應的原因錯綜復雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導致原抗體的聯(lián)絡(luò )結合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現象。導致樣本值無(wú)法計算出數值，或許數值為負。
　　雖然原因復雜，但有方法可以用來(lái)評估基質(zhì)效應。
　　第一種方法是采用線(xiàn)性稀釋?zhuān)话銇?lái)講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合，而造成基質(zhì)效應的非特異結合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結合造成的干擾會(huì )逐步減少，測量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應時(shí)，稀釋會(huì )造成非特異性結合比例的減少，測量值也相應地產(chǎn)生很大改變。
　　第二種方法是摻入回收率實(shí)驗，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現?；厥章式橛?0-120%，才符合標準。
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