細小病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：豬細小病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus  （ELISA）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 豬細小病毒病是由豬細小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）引起的豬的繁殖障礙性疾病，其特征為受感染的母豬，特別是初產(chǎn)母豬產(chǎn)出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬，而母豬本身無(wú)明顯癥狀。

本試劑用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體，可用于豬細小病毒疫苗免疫效果評價(jià)。

【原    理】

    本試劑盒由預包被豬細小病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細小病毒抗體。實(shí)驗時(shí)在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬細小病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶標結合物反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬細小病毒抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(cháng)的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.取動(dòng)物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長(cháng)期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽(yáng)性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對照孔分別加入陰、陽(yáng)性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?0分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(cháng)）測定各孔吸光值，無(wú)參比波長(cháng)用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3，陽(yáng)性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。

【檢驗結果的判定】

1.樣品的OD值即ODS；

2.閾值計算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2，結果判定為陽(yáng)性；SP值＜0.2，結果判定為陰性。

3.本實(shí)驗結果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬細小病毒抗體，根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

【注意事項】

1.實(shí)驗操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實(shí)驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應恢復至室溫方可開(kāi)袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結晶，使用時(shí)需恢復至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。